光散射與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用于白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)：聯(lián)合應(yīng)用激光射的過(guò)氧化物酶染色技術(shù)來(lái)進(jìn)行白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。嗜酸性粒細(xì)胞有很強(qiáng)的過(guò)氧化物酶活性，中性粒細(xì)胞有較強(qiáng)的過(guò)氧化物酶活性，單細(xì)胞資助之，而淋巴細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞均無(wú)此酶。

將血興高采烈經(jīng)過(guò)氧化物酶染色后，胞質(zhì)內(nèi)即可出現(xiàn)不同的酶化學(xué)反應(yīng)，由此構(gòu)成了此種血液分析儀的分析基礎(chǔ)，化妝品的分血器將血加入到含有清洗劑和甲醛的高滲液體內(nèi)（21倍稀釋）并孵育（400～700）20秒鐘。其中清洗劑（含有非離子表面活性劑）使細(xì)胞破壞，甲醛使白細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶被固定，此后發(fā)生第二步反應(yīng)，即加入過(guò)氧化氫和4氯=蔡酚，并加熱13秒，此時(shí)如果待測(cè)細(xì)胞質(zhì)中含有過(guò)氧化酶即可分解H2O2產(chǎn)生[O]，后者可使4氯-蔡酚顯色并沉積定位于酶反應(yīng)部位，此類細(xì)胞通過(guò)測(cè)試區(qū)時(shí)，由于酶反應(yīng)強(qiáng)度不同（陰性、弱陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性）和細(xì)胞體大小不同，激光束射互細(xì)胞上的前向角和散射角有所不同，以X軸為吸光率標(biāo)記（酶反應(yīng)強(qiáng)度），Y軸為光散射（細(xì)胞大小）。每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生的兩個(gè)信號(hào)結(jié)合定位在細(xì)胞圖上（圖2-18）。每秒鐘儀器可測(cè)上千個(gè)細(xì)胞。計(jì)算機(jī)系統(tǒng)對(duì)存儲(chǔ)的資料進(jìn)行分析處理，并結(jié)合嗜好堿性粒細(xì)胞或分葉核粒細(xì)胞通道結(jié)果計(jì)算出白細(xì)胞總參數(shù)和分類良數(shù)。

圖2-18 激光與細(xì)胞化學(xué)聯(lián)合檢測(cè)白細(xì)胞直方示意圖

4．多角度偏振光散射白細(xì)胞分類技術(shù)（multi — Angle polatised scatter separation of white cell,MAPSS）其原理是一定體積的全血標(biāo)本用鞘流液按適當(dāng)比例稀釋。其白細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)近似于自然狀態(tài)，因嗜堿性粒細(xì)胞嘌粒具有吸濕的特性，所以嗜堿性粒細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有輕微改變。紅細(xì)胞內(nèi)部的滲透透壓高于鞘興高采烈的滲透壓而發(fā)生改變，紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白從細(xì)胞內(nèi)游離出來(lái)，而鞘液內(nèi)的水分進(jìn)入紅細(xì)胞中，細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)仍然完整，但此時(shí)的紅細(xì)胞折炮指數(shù)與鞘液的相同，故紅細(xì)胞不干擾白細(xì)胞檢測(cè)。

在水動(dòng)力系統(tǒng)的作用下，樣本被集中為一個(gè)直徑為30μm的小股液流，該液流將稀釋細(xì)胞單個(gè)排列，因是單個(gè)通過(guò)激光束，故在各個(gè)方向都有其散射光?？梢詮乃膫€(gè)角度測(cè)定散射光的密度（見(jiàn)圖2-19）：①00：前角光散射（10～30）粗略地測(cè)定細(xì)胞大??；②100：狹角光散射（70～110）測(cè)細(xì)胞結(jié)構(gòu)及其復(fù)雜性的相對(duì)特征；③900：900消偏振光散射（700`～1100），基于顆?？梢詫⒋怪苯嵌鹊钠窦す庀竦奶匦?，將嗜酸細(xì)胞從中性粒細(xì)胞和其它細(xì)胞中分離出來(lái)。④900：垂直光散射（700～1100）主要對(duì)細(xì)胞內(nèi)部顆粒和細(xì)胞成分進(jìn)行測(cè)量?？梢詮倪@四個(gè)角度同時(shí)對(duì)個(gè)白細(xì)胞進(jìn)行測(cè)量，同一種特定的程序自動(dòng)儲(chǔ)存和分析數(shù)據(jù)，將白細(xì)胞分為嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞5種。

圖2-19 MAPSS測(cè)量原理